An insight into the histopathology caused by the tick Rhipicephalus sanguineus (Acarina: Ixodidae) in the skin of previously infested, vaccinated or tick-bite naive dogs, guinea pigs and hamsters

Dogs', guinea pigs' and hamsters’ local skin reaction to the attachment and feeding of the tick Rhipicephalus sanguineus were analysed under light microscopy. The hosts were either tick-bite naive, previously infested or vaccinated with crude unfed adult tick extract. Biopsies were taken at the end of each infestation. Changes common to every host, regardless of experimental group, included presence of tick or its mouthparts embedded in a cone of cementum at the surface of the skin, epidermal hyperplasia, hyperkeratosis and acanthosis, edema and copious inflammatory cell infiltration in the dermis, underneath the tick attachment site. Dogs in all experimental groups reacted with an almost exclusive PMN neutrophil accumulation, while guinea pigs showed a predominantly mononuclear cell infiltration in every experimental group. Hamsters suffering first infestations had a mainly neutrophilic infiltration, showed a predominantly mononuclear cell infiltration in response to multiple infestations, and when previously vaccinated this host had a predominantly eosinophilic infiltration. The persistence of PMN neutrophils in dogs suggest a control of the local immune inflammatory response by the tick. The predominantly eosinophilic infiltration in previously vaccinated hamsters might indicate that different immune mechanisms were triggered by infestation and vaccination.Analisou-se, sob microscopia óptica, reação cutânea de cães, hamsters e cobaia à fixação e alimentação do carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os hospedeiros empregados foram previamente infestados ou vacinados com extrato total de carrapato adulto não alimentado ou eram livres de contato anterior com o carrapato. Biópsias foram obtidas ao final de cada infestação. As alterações comuns a todos os hospedeiros, independente do grupo experimental, incluíram a presença de carrapato ou de suas peças bucais embutidos em um cone de cemento na superfície da pele, hiperplasia da epiderme, hiperqueratose e acantose, edema e infiltração celular inflamatória intensa na derme abaixo do ponto de fixação do carrapato. Os cães, em todos os grupos experimentais, reagiram com um acúmulo praticamente exclusivo de neutrófilos polimorfonucleares enquanto cobaias exibiram uma infiltração celular predominantemente mononuclear nas diversas condições experimentais. Hamsters sofrendo primeira infestação apresentaram uma infiltração predominantemente neutrofílica, infiltração predominantemente mononuclear em resposta a múltiplas infestações e, quando vacinados, uma infiltração preponderantemente eosinofílica. A persistência de neutrófilos nos cães sugere um controle local da resposta inflamatória imune pelo carrapato. A infiltração predominantemente eosinofílica em hamsters vacinados poderia indicar que mecanismos imunes diferentes foram desencadeados pela infestação e vacinação

A pro-inflammatory effect of foot and mouth disease vírus on immune and non immune guinea pigs

A estirpe O1Campos do vírus da febre aftosa (VFA) usada como agente indutor do teste de pleurisia foi capaz de desencadear um efeito pró-inflamatório em cobaias normais e imunes. A atividade pró-inflamatória do VFA, detectada em dois intervalos de pleurisia (24 e 48 horas) foi demonstrada, somente por quimiotaxia de leucócitos mononucleares (MN), no primeiro intervalo e por efeito edematogênico, migração de MN e polimorfonucleares (PMN), no último intervalo de reação. Os perfis de reação inflamatória induzida pelo VFA em cobaias imunes (imunizadas com vacinas oleosas anti-VFAO1Campos), aos 7 e aos 30 dias pós-vacinação (PV) apresentaram imensidades mais baixas do que as observadas em cobaias normais, embora nas cobaias com 7 dias de vacinação a quimiotaxia de leucócitos totais e de PMN tenha sido similar àquela encontrada nos animais normais, no intervalo de 48 horas de reação. Ademais, nas cobaias com 30 dias PV, o VFA induziu um aumento significante no volume de exsudato e na infiltração de MN, no intervalo de 24 horas, sendo que os valores de todos os parâmetros do exsudato inflamatório caíram a níveis normais, no segundo intervalo de reação. Nas cobaias imunes foi observada uma associação negativa entre o aumento no título de anticorpos soro-neutralizantes, de 7 para 30 dias PV e as intensidades dos parâmetros inflamatórios pleurais. O teste de pleurisia revelou-se um procedimento adequado para avaliar a atividade próinflamatória do VFA.The O1Campos strain of foot and mouth disease virus (FMDV) used as inducing agent in the pleurisy model was able to trigger a pro-inflammatory effect on normal and immune guinea pigs. The proinflammatory activity which was detected at two times of the pleurisy (24 and 48 hours) on normal guinea pigs was characterized only by mononuclear (MN) cell influx, during the first interval of the reaction and by edematogenic effect, MN and polimorphonuclcar (PMN) leucocyte migration, at the last time of the reaction. The inflammatory reaction profiles recorded on immune guinea pigs (vaccinated with anti-O1Campos oil adjuvanted vaccine), both after 7 and 30 days post vaccination (pv) have showed, in both interval, lower intensities than that observed in normal guinea pigs, although in the 7 days PV guinea pigs the accumulations of total leucocytes and PMN were similar to that displayed by normal animals, after 48 hours of the reaction. Besides, on thirty days PV guinea pigs the FMDV induced a significant increase in volume of exudate and MN cell infiltration, after 24 hours, and all of the inflammatory parameters values dropped to normal levels, during the second interval of the reaction. It was found a negative association between the increase in serum neutralizing antibody titer, from 7 to 30 days PV and the intensities of pleural inflammatory parameters on the immune guinea pigs. The pleurisy test revealed itself feasible to evaluate the pro-inflammatory activity of FMDV

Immunity ticks Rhipicephalus sanguineus (Latreille) in crab-eating-fox Cerdocyon thous (Linnaeus) and mongrel dogs

Algumas das relações hospedeiro-parasita são marcadas por desenvolvimento de resistência pelo hospedeiro, limitando o número de parasitas. Tal não ocorre na relação cão doméstico x Rhipicephalus sanguineus (carrapato do cão). Teria o cão doméstico perdido aquela capacidade em seu processo de domesticação? Esta hipótese foi testada em duas condições, comparando-se a aquisição de imunidade ao carrapato R. sanguineus pelo cão doméstico em relação ao cachorro-do-mato Cerdocyon thous após três infestações sucessivas por carrapatos adultos, ou através de infestação desafio após imunização com um homogenato bruto de carrapatos da mesma espécie. A aquisição ou não de resistência foi avaliada a partir da análise do desempenho alimentar e reprodutivo das carrapatas durante e após as infestações. Os resultados indicaram uma pequena diferença significativa entre o cão doméstico e o cachorro-do-mato quanto ao desenvolvimento de resistência ao carrapato R. sanguineus, que, entretanto, não foi considerada relevante na caracterização de uma imunidade efetiva.Many parasite-host relationships are characterized by the development of resistance by the host, thus limiting the number of parasites. However, in the domestic dog X Rhipicephalus sanguineus (brown dog tick) relationship, this does not occur. The hypothesis that the domestic dog has lost this faculty, following the process of its domestication, was investigated by comparing the mongrel dog’s and the crab-eating-fox Cerdocyon thous's capacity of acquiring immunity to R. sanguineus ticks in two situations: after, 3 successive infestations with adult ticks, and immunisation with an unfed whole tick R. sanguineus extract, followed by a challenge infestation with the same tick species. Evaluation of resistance acquisition, in both experimental conditions, was based on nutricional and reproductive performaces of the female ticks during and after infestations. The results showed a small, significant difference between the domestic dog and the crab-eating-fox. Nevertheless, these differences were not considered relevant enough to characterize an effective immunity

Momento histopatológico na pele de cães, hamsters e cobaias sofrendo infestação experimental pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus pela primeira vez ou após vacinações ou infestações prévias

Analisou-se, sob microscopia óptica, reação cutânea de cães, hamsters e cobaia à fixação e alimentação do carrapato Rhipicephalus sanguineus. Os hospedeiros empregados foram previamente infestados ou vacinados com extrato total de carrapato adulto não alimentado ou eram livres de contato anterior com o carrapato. Biópsias foram obtidas ao final de cada infestação. As alterações comuns a todos os hospedeiros, independente do grupo experimental, incluíram a presença de carrapato ou de suas peças bucais embutidos em um cone de cemento na superfície da pele, hiperplasia da epiderme, hiperqueratose e acantose, edema e infiltração celular inflamatória intensa na derme abaixo do ponto de fixação do carrapato. Os cães, em todos os grupos experimentais, reagiram com um acúmulo praticamente exclusivo de neutrófilos polimorfonucleares enquanto cobaias exibiram uma infiltração celular predominantemente mononuclear nas diversas condições experimentais. Hamsters sofrendo primeira infestação apresentaram uma infiltração predominantemente neutrofílica, infiltração predominantemente mononuclear em resposta a múltiplas infestações e, quando vacinados, uma infiltração preponderantemente eosinofílica. A persistência de neutrófilos nos cães sugere um controle local da resposta inflamatória imune pelo carrapato. A infiltração predominantemente eosinofílica em hamsters vacinados poderia indicar que mecanismos imunes diferentes foram desencadeados pela infestação e vacinação

0 efeito potenciador do succinato de cloranfenicol sobre a pleurisia aguda induzida pela carragenina. Inibição por indometacina e dexametasona

The effect of indomethacin and dexamethasone on PMN cell migration was studied in relation to chloramphenicol in the pleural cavity of rats, 4 hours after local injection of carrageenin or dextran. Pre-treatment of rats with chloramphenicol succinate (30mg/kg), ip, every 12h, during 4 days, potentiated the migration of PMN leucocytes to the inflamed cavity, when carrageenin (150mcg) was used as an irritant. However, responses to dextran (100mcg) remained the same. Chloramphenicol pre-treated rats that received indomethacin (2mg/kg, per os, 30min before carrageenin) or dexamethasone (0.25mg/kg, ip, 30min before carrageenin) showed inhibition of potentiated cellular responses. Mechanisms of the potentiating effect of chloramphenicol on the acute carrageenin-induced inflammation remains unclear.Neste trabalho estudaram-se os efeitos da indometacina e dexametasona sobre a migração das células polimorfonucleares (PMN), produzida pelo cloranfenicol 4h após a aplicação intrapleural de carragenina ou dextrano. Demonstrou-se que o pré-tratamento de ratos com cloranfenicol (30mg/kg, ip, a cada 12h, por 4 dias) potenciou a migração de PMN para a cavidade inflamada, quando a carragenina (150mg) foi utilizada como estímulo inflamatório, enquanto a resposta ao dextrano (100mcg) não se alterou, em comparação com animais não tratados com o antibiótico. Ratos que receberam cloranfenicol e foram tratados com indometacina (2,0mg/kg, per os, 30 min antes da aplicação de carragenina) ou dexametasona (0,25mg/kg, ip, 30 min antes da aplicação de carragenina) apresentaram inibição das respostas celulares potenciadas. O mecanismo pelo qual o cloranfenicol produz aumento da resposta inflamatória permanece obscuro

Differences in the acquired resistance of dogs, hamsters, and guinea pigs to repeated infestations with adult ticks Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae)

Grupos experimentais de cães, hamsters e cobaias sem contato anterior com carrapatos, sofreram três infestações consecutivas por carrapatos Rhipicephalus sanguineus adultos e a resistência adquirida comparada com base na variação de alguns dos parâmetros biológicos da fêmea do carrapato. Os resultados mostraram que hamsters e cobaias principalmente, desenvolvem uma reação imune muito eficiente a esta espécie de carrapato como demonstrado por uma queda altamente significativa na taxa de eficiência da fêmea em converter sua reserva alimentar em ovos e larvas da primeira para as segunda e terceira infestações. Já cães foram incapazes de desenvolver tal resistência. Neste hospedeiro a performance das fêmeas dos carrapatos foi similar durante todas as infestações, havendo até uma tendência de melhora com a sucessão das infestações. Estes resultados reforçam a necessidade de estudos comparativos sobre a resistência adquirida a carrapatos, envolvendo hospedeiros naturais e não naturais, como forma de colocar em evidência mecanismos de defesa que possam estar alterados ou ocultos em relações parasita-hospedeiro naturais.Tick-bite naive experimental groups of dogs, hamsters and guinea pigs were infested three times with adult ticks Rhipicephalus sanguineus and the acquired resistance, based on the variation of some biological parameters of the female tick was compared. The results showed that hamsters and mainly guinea pigs develop a very efficient immunity to this tick species as demonstrated by a very significant drop in the efficiency rate of female ticks in converting their food reservoir to eggs and larvae from the first to the second and third infestations. At the same time, dogs were unable to display such a resistance. Female tick performance was similar throughout the infestations in this host; there was even a tendency of improvement of the performance with the succession of infestations. These results underline the need of comparative studies on the acquired resistance to ticks involving natural and unnatural hosts as a way of putting in evidence defence mechanisms which might be altered or hidden in natural host - parasite relationships

Comparação entre os efeitos da mistura gelatinaresorcina- formaldeido (Colagel®) e do n-butil-2- cianoaerilato (Histoacryl®) na esofagoplastia cervical de coelhos (Oryctolagus cuniculus; Linnaeus 1758). Estudo clínico e morfológico

Objetivou-se, tendo em vista as particularidades anatômicas e fisiológicas do esôfago e sua correlação com a gênese de deiscências, estudar comparativamente os efeitos de dois adesivos cirúrgicos, Colagel® e Hystoacrir, no reforço de suturas para a síntese do órgão. Os procedimentos, conduzidos em 18 leporinos da raça Nova Zelândia, buscaram, na ordem, investigara evolução clínica dos animais, bem como a macroscopiae a microscopiadas feridas cirúrgicas, quanto à evolução da cicatrização. Os resultados obtidos mostraram, clínica e macroscopicamente, alterações de maior significado e, microscopicamente, predomínio de polimorfonucleares eosinófilos nas suturas recobertas pelo Colagel®, comparativamente às mantidas como controle e às “protegidas'1 pelo Histoacryl® .Houve retardo na cicatrização das feridas que receberam o Colagel®.The objetive of the study was to test two types of adhesives, Colager and HistoacryP in the impermeabilization of the suture line, by comparing them to classic esophagotomy, because of the anatomic peculiarity of the esophagous in relation to dehiscence, mostly in humans.The experiment was conducted in 12 rabbits, and the clinic, macroscopic and microscopic patterns of the wounds were observed in three different times, which are related to distinct phases of the healing process.The results show an intense infiltrate of  polymorphonuclear cells (mainly eosinophils) in animals in which it was utilized the Colager, compared to controls and to the animals in which it was used the Histoacryl®. Based on these results it was infered that the healing process was delayed in injuries in which Colager was applied

uncovering differences during Ehrlichia canis infection

The tick vector Rhipicephalus sanguineus is established as a complex of closely related species with high veterinary-medical significance, in which the presence of different genetic, morphological, and biological traits has resulted in the recognition of different lineages within taxa. One of the most striking differences in the "temperate" and "tropical" lineages of R. sanguineus (s.l.) is the vector competence to Ehrlichia canis, suggesting that these ticks tolerate and react differently to pathogen infection. The present study addresses the SG and MG proteome of the R. sanguineus tropical and temperate lineages and compares their proteomic profile during E. canis infection. Batches of nymphs from the two lineages were allowed to feed on naïve and experimentally E. canis infected dogs and after molting, adults were dissected, and salivary glands and midgut tissues separated. Samples were screened for the presence of E. canis before proteomic analyses. The representation of the proteins identified in infected and non-infected tissues of each lineage was compared and gene ontology used for protein classification. Results highlight important differences in those proteomic profiles that added to previous reported genetic, biological, behavioral, and morphological differences, strengthening the hypothesis of the existence of two different species. Comparing infected and non-infected tissues, the results show that, while in midgut tissues the response to E. canis infection is similar in the salivary glands, the two lineages show a different pattern of protein representation. Focusing on the proteins found only in the infected condition, the data suggests that the cement cone produced during tick feeding may be implicated in pathogen infection. This study adds useful information to the debate on the controversial R. sanguineus systematic status, to the discussion related with the different vectorial competence occurring between the two lineages and identifies potential targets for efficient tick and tick-borne disease control.publishersversionpublishe

Ticks as potential vectors of Mycobacterium leprae: Use of tick cell lines to culture the bacilli and generate transgenic strains.

Leprosy is an infectious disease caused by Mycobacterium leprae and frequently resulting in irreversible deformities and disabilities. Ticks play an important role in infectious disease transmission due to their low host specificity, worldwide distribution, and the biological ability to support transovarial transmission of a wide spectrum of pathogens, including viruses, bacteria and protozoa. To investigate a possible role for ticks as vectors of leprosy, we assessed transovarial transmission of M. leprae in artificially-fed adult female Amblyomma sculptum ticks, and infection and growth of M. leprae in tick cell lines. Our results revealed M. leprae RNA and antigens persisting in the midgut and present in the ovaries of adult female A. sculptum at least 2 days after oral infection, and present in their progeny (eggs and larvae), which demonstrates the occurrence of transovarial transmission of this pathogen. Infected tick larvae were able to inoculate viable bacilli during blood-feeding on a rabbit. Moreover, following inoculation with M. leprae, the Ixodes scapularis embryo-derived tick cell line IDE8 supported a detectable increase in the number of bacilli for at least 20 days, presenting a doubling time of approximately 12 days. As far as we know, this is the first in vitro cellular system able to promote growth of M. leprae. Finally, we successfully transformed a clinical M. leprae isolate by inserting the reporter plasmid pCHERRY3; transformed bacteria infected and grew in IDE8 cells over a 2-month period. Taken together, our data not only support the hypothesis that ticks may have the potential to act as a reservoir and/or vector of leprosy, but also suggest the feasibility of technological development of tick cell lines as a tool for large-scale production of M. leprae bacteria, as well as describing for the first time a method for their transformation